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制備型液相色譜的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)

更新時間:2021-12-22      點擊次數(shù):2172
  制備型液相色譜通常都被認為和大容量色譜柱和高流速有關聯(lián)的。然而并不是以設備的大小和系統(tǒng)消耗的流動相的多少來決定制備液相色譜,而是依據(jù)分離目的來決定。分析液相的目的是給一種組份進行定量和定性。制備液相的目的是對產(chǎn)品的單體進行提取和純化。與傳統(tǒng)的純化方法(如蒸餾、萃?。┍容^,制備液相是一種更有效的分離方法,因此被廣泛應用在樣品和產(chǎn)品的提取和純化上。隨著合成、植化、生化和制藥等領域?qū)Ω呒兌冉M份的需求不斷增加,制備型液相色譜儀應用的領域也在迅速的擴大發(fā)展。
  制備型液相色譜的分離目的是從混合物中得到純物質(zhì)。為了縮短分離時間和提高分離效率,制備型液相色譜的的進樣品量很大,導致色譜柱的分離負荷相應加大,因此必須加大色譜柱填料,增大柱內(nèi)徑和柱長,使用的流動相相對增多。然而,當色譜柱上的樣品負載加大時,往往會導致柱效急劇下降而得不到純產(chǎn)品。制備型液相色譜要解決容量與柱效之間的矛盾,對重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟上來說,要少用填料,少用溶劑,盡可能多的得到產(chǎn)品。
  一、樣品的前處理:
  制備型液相色譜柱分離的樣品多,比分析型液相色譜柱更容易受污染,樣品前處理非常必要。
  二、TFA在緩沖液中的作用:
  1、TFA起到類似離子對的作用,一般濃度在0.05%~0.1%。濃度過高會使溶液偏酸,長時間使用可能影響色譜柱壽命。
  2、TFA可抑制硅膠表面的硅醇基,改善堿性化合物的峰形。若0.1%TFA分離不好,可加大濃度到0.2%,但用完后要及時沖洗色譜柱。
  3、走梯度時走成基線漂移,但對制備影響不大。
  三、降低柱壓的方法:
  采用1%乙酸水溶液和甲醇二元梯度。
  四、提高檢測下限的方法:
  1、如果是等度洗脫,一定要改成單元等度。
  2、盡量采用乙腈-水系統(tǒng)洗脫。乙腈紫外吸收小,相同條件下噪音小。
  五、用水要求:
  不含金屬離子和細菌。
  六、分析方法開發(fā)中流動相的調(diào)整原則:
  1、由強到弱:
  一般先用90%的乙腈或甲醇-水或緩沖溶液進行試驗,可很快得到分離結果,然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
  2、三倍規(guī)則:
  每減少10%的有機溶劑(乙腈或甲醇)的量,保留因子增加約3倍,此為三倍規(guī)則。調(diào)整時注意觀察各個峰的分離情況。
  3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):
  當分離達到一定程度時,應將有機溶劑(乙腈或甲醇)10%的改變量調(diào)整為5%,并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。
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